NuSmart^®植物組織PCR試劑盒

（免核酸提取）

試劑盒應(yīng)用

本試劑盒適用于煙草、擬南芥、水稻、大豆、油菜、玉米、小麥等葉片和種子的PCR、熒光定量PCR 檢測(cè)。使用該試劑盒無需液氮研磨，無需使用有機(jī)試劑，無需重復(fù)離心便可獲得用于PCR反應(yīng)的基因組模板。

依托Nu-Smart^®平臺(tái)DNA-Lysis采用zhuan利配方，5分鐘內(nèi)獲得花瓣、花蕊、種子、葉片、根、莖等樣本的基因組DNA。葉片僅僅需取材1-4mm，取樣量小，減少對(duì)樣品的損耗。

預(yù)制的2×TaqMix (With Dye)只需要加入引物和模板DNA即可進(jìn)行PCR反應(yīng)，減少移液次數(shù)，實(shí)現(xiàn)高通量擴(kuò)增。該體系中添加有電泳緩沖液和染料，PCR結(jié)束后直接進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，使用方便快捷。

本試劑盒僅供研究使用，不可用于臨床、食品、化妝品等領(lǐng)域。

試劑盒組成

保存條件

-20oC保存。

使用前將DNA-Lysis室溫充分混勻，經(jīng)常使用可4℃保存。

2×TaqMix (With Dye)溶解后需置于冰上，避免反復(fù)凍融。

需要準(zhǔn)備

金屬恒溫浴、PCR儀

使用方法

一、不同樣品的處理方法

1. 葉片的處理

（1）用眼科剪或葉片取樣器剪取1-4mm的葉片。

（2）加入20 μL DNA-Lysis。

（3）充分混勻。

（4）置于55℃作用5分鐘。溶液即為DNA模板。

2. 種子和果實(shí)的處理

（1）研磨后種子或1-2mm果肉放入離心管中。

（2）加入20 μL DNA-Lysis。

（3）充分混勻。

（4）置于55℃作用5分鐘。

（5）10,000rpm離心1分鐘，上清即為DNA模板。

二、推薦PCR反應(yīng)體系

※：引物濃度可以在0.1-0.5 μM范圍內(nèi)進(jìn)行調(diào)節(jié)。

三、按照以下方法設(shè)定PCR反應(yīng)

注意事項(xiàng)

一、試劑盒使用前注意事項(xiàng)

（1）所有試劑應(yīng)按照zhi定溫度儲(chǔ)存。請(qǐng)勿反復(fù)凍融。

（2）使用前后均需要對(duì)操作區(qū)進(jìn)行消毒，消毒方式可以采用75%乙醇或核酸消除劑等。耗材均需使用商品化的無酶耗材。

（3）DNA-Lysis頻繁使用，可在4℃保存。長(zhǎng)期不使用可放-20℃保存。

二、樣本注意事項(xiàng)

（1）不同葉片使用不同的取樣器進(jìn)行處理，防止交叉污染導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果偏差。

（2）葉片剪取不宜過大，以1-4mm為宜。

（3）種子樣本大小不一，建議研磨后使用。

三、試劑盒使用過程中注意事項(xiàng)

（1）PCR過程中推薦使用陰性對(duì)照和陽性對(duì)照。

（2）整個(gè)過程中使用的吸頭、離心管等耗材應(yīng)丟棄在含有75%乙醇或核酸消除劑的容器中，減少環(huán)境污染。

（3）2×TaqMix (With Dye)包含染料，可在反應(yīng)結(jié)束后直接進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳。

（4）不能使用其他品牌的taq酶，進(jìn)行PCR擴(kuò)增檢測(cè)。

四、試劑盒使用后注意事項(xiàng)

（1）DNA-Lysis處理后的DNA模板可在-20℃保存至少1個(gè)月，如需長(zhǎng)期保存，可離心后取上清置-80℃保存。避免反復(fù)凍融，防止基因組斷裂。

（2）PCR反應(yīng)完成后，嚴(yán)禁在實(shí)驗(yàn)區(qū)開蓋。應(yīng)在污染區(qū)進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，防止氣溶膠污染。

（3）為防止試劑盒污染，請(qǐng)勿將不同批號(hào)試劑盒混用。